1.0目的
制定使用歧管的膜过滤法对样品进行无菌测试的程序。
2.0范围
适用于质量控制微生物实验室中稀释研究和稳定性研究样品的无菌测试。
3.0责任
受过训练的质量控制/微生物学
4.0问责制
部门主管
5.0程序
5.1一般说明和注意事项
5.1.1按照SOP进入和退出微生物检测和无菌检测区域。
5.1.2确保所有无菌或无菌物品在日期之前有效/未过期，并且包装袋是完整的。如果发现任何包装损坏或完整性受损，请不要使用此类材料。
5.1.3确保要使用的所有培养基和稀释剂均已预先孵育。检查介质是否受到污染或物理损坏。对于液体硫代乙醇酸酯培养基，如果超过三分之一的培养基已获得粉红色（刃天青环），则请勿使用此类培养基容器。
5.1.4检查物理参数（温度，湿度和压差）），并在开始活动前确保它们在限制范围内。
5.1.5在每次无菌测试期间，应按照SOP 进行环境监测。
5.2将材料转移到无菌测试区和cRABS
5.2.1进行无菌测试所需的材料，如培养基，冲洗液或稀释剂，测试附件即，镊子，剪刀，带有管道的春分排水盘，排水收集容器等，应在高压
灭菌器中灭菌，卸载并储存在无菌环境中一侧（缓冲室）。
5.2.2所有其他材料应按以下方式转移：
5.2.2.1将所有与无菌性测试有关的材料（例如样品和其他无菌配件）保存在通向LAL测试室的培养箱中的通过箱中。
5.2.2.2从LAL室卸载物料并保存在LAF中。
5.2.2.3取下产品小瓶的翻转密封，并使用过滤的消毒液对小瓶的外表面进行消毒。
5.2.2.4使用过滤的消毒液消毒无菌附件包装的外表面。
5.2.2.5将所有物料转移到动态通道箱开口处至缓冲室。确保动态通道盒处于开启状态。
5.2.2.6从缓冲室卸下物料，然后转移到无菌测试室。
5.2.3按照SOP
5.2.4 操作cRABS 5.2.4将所有必需的材料，如培养基容器，已消毒的配件（如歧管，过滤漏斗，镊子，剪刀等），已过滤的消毒液和70％IPA和产品样品送入无菌测试室。
5.2.5除产品样品外，所有材料均应保存在cRABS检验箱中。
5.2.6关闭cRABS通行箱，并用已过滤的70％IPA擦拭材料的外表面。打开紫外线灯，使材料暴露不少于15分钟。
5.2.7至少15分钟后，通过提供的通道将材料从cRABS通行箱转移到cRABS。
5.2.8如果是样品，请将其保存在cRABS 通行证箱中，关闭通行箱，并用过滤后的70％IPA擦拭样品的外表面。不要打开紫外线灯。让消毒剂干燥。
5.2.9通过提供的通道将样品从cRABS通行箱转移到cRABS。
5.2.10试验前，确保每件物品上的消毒剂均已正确干燥且包装成一体。
5.2.11将排水收集容器牢固地连接到cRABS排水口。
5.3样品要求
5.3.1容器数量：根据相应的规程
5.3.2待测样品的体积
稳定性样品：
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容器内容
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每种介质要测试的zui小数量
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少于1毫升
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总含量
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1至40毫升
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内容物的一半但不少于1毫升
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大于40毫升但小于100毫升
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20毫升
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100毫升以上
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含量的10％，但不少于20 ml
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注意：如果填充量大于10 ml，则考虑从3个小瓶中剩下的样品进行细菌内毒素测试（在测试之前合并）
稀释研究样品：根据各自的方案，但不少于20 ml
5.4使用流形的开放漏斗法进行无菌测试
5.4.1将无菌歧管放置在cRABS内，并通过排水收集容器或烧瓶连接到真空泵。
5.4.2将无菌的膜过滤漏斗放在歧管的支架上。将无菌的0.45µ 膜过滤器放在过滤漏斗的过滤器支架上。
5.4.3打开过滤组件的盖子，并用100 ml冲洗液润湿膜，然后打开真空泵进行过滤。
5.4.4无菌地打开产品容器的密封并将每个产品容器的内容物转移到过滤组件中。或者，使用无菌注射器和针头无菌取出内容物并转移。如果是冻干产品，请先用所需体积的无菌稀释剂重新配制样品，然后再转移内容物。
5.4.6打开真空泵并过滤内容物。
5.4.7过滤样品后，加入100 ml冲洗液并过滤。重复此过程，直到3 x 100 ml冲洗液通过膜过滤。
注意：如果与以上不同，应根据验证更改冲洗液和冲洗液的体积。
5.4.8冲洗后，用无菌镊子和剪刀将膜无菌切成两半。将膜的一半转移到100 ml大豆酪蛋白消化培养基中，另一部分转移到100 ml硫代乙醇酸液体培养基试管中。
5.4.9在试管上贴上产品名称，批号/ AR号，介质批号，日期和分析员姓名缩写。
5.5负面产品控制测试
5.5.1在每个无菌测试阶段进行一次阴性对照测试，以作为测试阶段中培养基和稀释液无菌性和条件的对照。
5.5.2通过以100毫升0.1％无菌蛋白water水为产品并在操作过程中进行以下
zui大操作来进行测试：5.5.2.1如果在测试过程中进行的zui大操作是针对冻干产品，则所有步骤冻干产品测试中涉及的产品应进行阴性产品控制。
5.5.2.2如果在测试期间对液体产品进行的zui大操作，则应对液体产品中涉及的所有步骤进行负面产品控制。
5.6物料的转移和处置
5.6.1测试完成后，将所有附件，用过的样品容器，空的介质稀释剂容器通过通道箱从缓冲室转移到高压灭菌室，转移到高压灭菌区。
5.6.2将培养罐和培养基管通过动态传递箱从缓冲室转移到LAL测试室，然后通过传递箱从LAL测试室传递到培养箱。
5.6.3用过滤的消毒剂清洁cRABS。通过将足够量的消毒剂溶液通过端口和管道转移，使所有表面都与消毒剂溶液接触，从而对端口和管道进行消毒以收集下水道。
5.6.4如果排水收集管关闭阀门，则断开不锈钢打开TC夹以打开容器。通过缓冲室中的通过箱将容器转移到高压
灭菌器中。
5.6.5通过添加适当的去活剂去活容器中的溶液，并按照SOP进行处置。
5.7孵化与观察
5.7.1在22.5±2.5°C下孵育大豆酪蛋白消化培养基（SCM）无菌试管，在32.5±2.5°C下孵育液体硫代乙醇酸酯培养基（FTG）无菌试管14天。
5.7.2在每个工作日中，检查在14天的温育期内微生物生长的迹象，并记录结果。如果第14天是每周休息或放假，则在下一个工作日进行观察。
5.7.3在观察过程中，任何浑浊，浑浊，沉淀，棉球类型增长，透明介质（涡旋时底部从底部升起）的明显增长的证据，然后移开此类罐/管并按照SOP 进行识别/调查。在这种观察的那天。
5.7.4孵育结束后，请按照下列说明处理培养基SOP处理媒体。
5.8验收标准
5.8.1在培养期结束时，如果在任何无菌测试介质中都没有微生物生长的迹象，则被测样品/产品符合无菌要求。
5.8.2如果在任何一种介质中均发现了微生物生长的证据，则被测试的样品/产品不符合无菌测试，除非可以清楚地证明该测试对与样品/产品无关的原因无效经过测试。仅当满足以下一个或多个条件时，该试验才被视为无效：
5.8.2.1对无菌试验区进行的微生物监测表明存在故障。
5.8.2.2对所涉及的测试过程中使用的测试程序进行检查可以发现故障。
5.8.2.3在阴性对照中发现微生物生长。
5.8.2.4在确定从测试中分离出的微生物的身份之后，可以明确地将该物种（或这些物种）的生长归因于进行无菌测试程序所用的材料和/或技术的缺陷。
5.8.5如果宣布测试无效，则必须以与原始测试相同的单位数重复进行测试。
5.8.6如果在重复测试中没有发现微生物生长的迹象，则所检查的产品符合无菌测试。
5.8.7如果在重复测试中发现微生物生长，则所检查的产品不符合无菌测试。
有关：真菌和细菌常用培养基的培养条件
6.0缩写
6.1 SOP-标准操作程序
6.2 cRAB-封闭式限制进入障碍系统
6.3％-百分比
6.4 UV-紫外线
6.5°C-摄氏度
6.6 ml-毫升
6.7 SCA-大豆酪蛋白消化琼脂
6.8 SCM-大豆酪蛋白消化培养基
