在消毒和灭菌之前需要彻底清洁：所有其他条件保持不变，微生物数量越多，杀菌剂需要消灭所有微生物的时间越长。
斯波尔丁说明了这种关系，当他采用相同的测试条件并证明需要30分钟杀死10株萎缩芽孢杆菌（原枯草芽孢杆菌）孢子，但需要3小时才能杀死100,000株萎缩芽孢杆菌孢子。这加强了在消毒和灭菌之前对医疗器械进行严格清洁的需要。减少必须通过细致清洁灭活的微生物数量，增加了根据标签使用杀菌剂时的安全范围，并缩短了杀死整个微生物负荷所需的暴露时间。
灭菌剂对微生物的可及性：当评估影响杀菌剂功效的因素时，还必须考虑微生物的位置。必须拆卸具有多个部件的医疗器械，并且诸如具有裂缝，接头和通道的内窥镜之类的设备比平面设备更难以消毒，因为设备的所有部件的消毒剂的渗透更加困难。只有直接接触杀菌剂的表面才会被消毒，因此必须没有气穴，并且设备必须在整个暴露期间完全浸没。应鼓励制造商生产易于清洁和消毒的设备。