1、器件  

  牛肉膏蛋白胨培育基，培育皿（6套一包），手提式高压蒸汽菌锅等。  

2、操作过程  

  1．shou先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内参加适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。  

  2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，避免防碍蒸汽流转而影响灭菌作用。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，避免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。  

  3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的办法一起旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。  

  4．用电炉或煤气加热，并一起翻开排气阀，使水欢腾以扫除锅内的冷空气。待冷空气彻底排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力添加而逐步上升。当锅内压力升到所需压力时，操控热源，保持压力**所需时刻。本试验用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。  

  5．灭菌所需时刻到后，堵截电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度天然下降，当压力表的压力降**0时，翻开排气阀，旋松螺栓，翻开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，翻开排气阀，就会因锅内压力俄然下降，使容器内的培育基由于表里压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，构成棉塞感染培育基而发作污染。  

  6．将取出的灭菌培育基放入 37℃温箱培育24小时，经查看若无杂菌成长，即可待用。  

稀释倒平板法  

  先将待分离的资料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分别取不同稀释液少量，与已溶化并冷却** 45 ℃左右的琼脂培育基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培育皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培育必定时刻即可出出菌落。如果稀释妥当，在平板外表或琼脂培育基中就可呈现涣散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁衍构成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培育。倒平板的两种办法 持皿法 

  ⑴将若干无菌培育皿叠放在左侧，便于拿取。  

  ⑵点着煤气灯，将火焰调到适中（空气不要太大，避免气流过急）。  

  ⑶倒平板时，先用左手抓住三角瓶的底部，倾斜三角瓶，用右手旋松棉塞，然后用右手的小指和手掌边际夹住棉塞并将它拔出（切勿将棉塞放在桌面上），随之将瓶口周缘在火焰上过一下（不行灼烧，以防爆裂，以杀死可指沾在瓶口外的杂菌。然后将三角瓶从左手传**右手中（用右手的拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部），在这操作过程中瓶口应保持在离火焰2~3处，瓶口始终向着火焰。左手拿起一套培育皿，用中指、无名指和小指托住培育皿底部，用食指和大拇指夹住皿盖并敞开一缝，刚好能让三角瓶伸入，随后倒出培育基。一般约倒入12ml的培育基即可铺满整个皿底。盖上皿盖，置水平方位等凝。然后再将三角瓶移**左手，瓶口再次过火并塞紧棉塞。    平板培育基的冷凝办法有两种，一种是将平板一个个摊开在桌面上冷凝，另一办法是将几个平板叠在一起冷凝。前者冷凝速度较快，在室温较高时选用；而后者冷凝速度较慢，可在室温较低时选用，其长处是构成冷凝水少，特别适用于平板划线等的需求。  

叠皿法 

  此法过程与持皿法根本相同。不同点是左手不用持培育皿，而是将培育皿叠放在煤气灯的左侧并接近火焰，用右手拿住三角瓶的底部，左手的掌背对着瓶口，用小指与无名指夹住瓶塞，将其拔出，随即使瓶口过火，一起用左手敞开**上面的皿盖，倒入培育基，盖上皿盖即移**水平方位待凝。再顺次倒下面的平板。在操作过程中，瓶口应向着火焰保持倾斜状，以防空气中微生物的污染