一、接种

将微生物接到适于它成长繁衍的人工培育基上或活的生物体内的进程叫做接种。

１、接种东西和办法

　　在试验室或工厂实践中，用得**多的接种东西是接种环、接种针。由于接种请求或办法的不一样，接种针的针尖部常做成不一样的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种东西进行液体接种。在固体培育基外表要将菌液均匀涂布时，需求用到涂布棒。（图３－３）　

图３－３　接种和别离东西

1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀

　　　

　　常用的接种办法有以下几种：

　　１）划线接种 这是**常用的接种办法。即在固体培育基外表作来回直线形的移动，就可到达接种的效果。常用的接种东西有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。

　　２）三点接种 在研讨霉菌形状经常用此法。此法即把少数的微生物接种在平板外表上，成等边三角形的三点，让它各自独立构成菌落后，来调查、研讨它们的形状。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

　　３）穿刺接种 在保藏厌氧菌种或研讨微生物的动力经常选用此法。做穿刺接种时，用的接种东西是接种针。用的培育基通常是半固体培育基。它的做法是：用接种针蘸取少数的菌种，沿半固体培育基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够成长。

　　４）浇混接种 该法是将待接的微生物先放入培育皿中，然后再倒入冷却**45°C摆布的固体培育基，敏捷轻轻摇匀，这么菌液就到达稀释的意图。待平板凝结以后，置适宜温度下培育，就可长出单个的微生物菌落。

　　５）涂布接种 与浇混接种略有不一样，即是先倒好平板，让其凝结，然后再将菌液倒入平板上面，敏捷用涂布棒在外表作来回摆布的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。

　　６）液体接种 从固体培育基中将菌洗下，倒入液体培育基中，或许从液体培育物中，用移液管将菌液接**液体培育基中，或从液体培育物中将菌液移**固体培育基中，都可称为液体接种。

　　７）打针接种 该法是用打针的办法将待接的微生物转接**活的生物体内，如人或其它动物中，多见的疫苗防止接种，即是用打针接种，接入人体，来防止某些疾病。

　　８）活体接种 活体接种是专门用于培育病毒或其它病原微生物的一种办法，由于病毒有必要接种于活的生物体内才干成长繁衍。所用的活体可所以全部动物；也可所以某个离体活安排，例如猴肾等；也可所以发育的鸡胚。接种的办法是打针，也可所以拌料喂食。

２、无菌操作

　　培育基经高压灭菌后，用经过灭菌的东西（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌资料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培育基上，这个进程叫做无菌接种操作。在试验室查验中的各种接种有必要是无菌操作。

　　试验台面不管是什么资料，一概请求润滑、水平。润滑是便于用消毒剂擦拭；水平是倒琼脂培育基时利于培育皿内平板的厚度保持一致。在试验台上方，空气活动应缓慢，杂菌应尽量削减，其周围杂菌也应越少越好。为此，有必要打扫室内，封闭试验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地削减杂菌的数量。

　　空气中的杂菌在气流小的状况下，跟着灰尘落下，所以接种时，翻开培育皿的时刻应尽量短。用于接种的用具有必要经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌办法：通常接种环在火焰上充沛烧红（接种柄，一边滚动一边慢慢地来回经过火焰三次），冷却，先触摸一下培育基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌资料或菌体，敏捷地接种到新的培育基上。（图３－４）然后，将接种环从柄部**环端逐步经过火焰灭菌，恢复。不要直接烧环，避免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面歪斜，把培育皿的盖翻开一小部分进行接种。在向培育皿内倒培育基或接种时，试管口或瓶壁外面不要触摸底皿边，试管或瓶口应歪斜一下在火焰上经过。

二、别离纯化

　　富含一种以上的微生物培育物称为混和培育物（Mixed culture）。假如在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培育（Pure culture）。在进行菌种鉴守时，所用的微生物通常均请求为纯的培育物。得到纯培育的进程称为别离纯化，办法有许多种。

１、倾泻平板法

　　shou要把微生物悬液经过一系列稀释，取必定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°摆布的养分琼脂培育基充沛混合，然后把这混合液倾泻到无菌的培育皿中，待凝结以后，把这平板倒置在恒箱中培育。单一细胞经过屡次增殖后构成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述过程数次，便可得到纯培育物。（图３－５，a）

1.菌悬液 2.熔化的培育基 3.培育物 4.无菌水

２、涂布平板法#p#分页标题#e#

　　shou要把微生物悬液经过适当的稀释，取必定量的稀释液放在无菌的现已凝结的养分琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培育基外表上，经恒温培育便能够得到单个菌落。（图３－５，b）

３、平板划线法

　　**简略的别离微生物的办法是平板划线法。用无菌的接种环取培育物少量在平板上进行划线。划线的办法许多，多见的对比简单呈现单个菌落的划线办法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。（图３－６）当接种环在培育基外表上往后移动时，接种环上的菌液逐步稀释，**终在所划的线上分散着单个细胞，经培育，每一个细胞长成一个菌落。（图３－７）

４、富集培育法

　　富集培育法的办法和原理十分简略。咱们能够**一些条件只让所需的微生物成长，在这些条件下，所需求的微生物能有效地与别的微生物进行竞赛，在成长才能方面远远超越别的微生物。所**的条件包括挑选**适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培育基和培育条件下，经过屡次重复移种，**终富集的菌株很简单在固体培育基上长出单菌落。假如要别离一些专性寄生菌，就有必要把样品接种到相应灵敏宿主细胞集体中，使其许多成长。经过屡次重复移种便能够得到纯的寄生菌。

　　　　

５、厌氧法

　　在试验室中，为了别离某些厌氧菌，能够使用装有原培育基的试管作为培育容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培育基中的溶解氧。然后迅速冷却，并进行接种。接种后，参与无菌的白腊于培育基外表，使培育基与空气阻隔。另一种办法是，在接种后，使用N2或CO2取代培育基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地别离某些厌氧菌，能够把所别离的样品接种于培育基上，然后再把培育皿放在彻底密封的厌氧培育装置中。

三、培育

　　微生物的成长，除了受自身的遗传特性决议外，还遭到许多外界要素的影响，如养分物浓度、温度、水分、氧气、ＰＨ等。微生物的品种不一样，培育的办法和条件也不尽相同。

１、影响微生物成长的要素

　　微生物的成长，除了受自身的遗传特性决议外，还遭到外界许多要素的影响。影响微生物成长的要素许多，简要介绍如下。

1) 养分物浓度

细菌的成长率与养分物的浓度有关:μ=μmax*C/(K+C)

 

　　养分物浓度与成长率的联系曲线是典型的双曲线。

　　K值是细菌成长的很根本的特性常数。它的数值很小，标明细菌所需求的养分浓度十分之低，所以在自然界中，它们处处成长。可是养分太低时，细菌成长就会遇到困难，甚**还会逝世。这是由于除了成长需求能量以外，细菌还需求能量来保持它的生计。这种能量称为保持能。另一方面，跟着养分物浓度的增加，成长率愈接近**大值。

２）温度

　　在必定的温度范围内，每种微生物都有自已的成长温度三基点：**低成长温度、**适成长温度和**高成长温度。在成长温度三基点内，微生物都能成长，但成长速率不一样。微生物只要处于**适成长温度时，成长速度才**快，代时**短。超越**低成长温度，微生物不会成长，温度太低，甚**会逝世。超越**高成长温度，微生物也要中止成长，温度过高。也会逝世。通常状况下，每种微生物的成长温度三基点是稳定的。但也常受其它环境条件的影响而发生变化。

　　依据微生物**适成长温度的不一样，可将它们分为三个类型：

　　a.嗜冷微生物：其是适成长温度多数在-10℃－20℃之间

　　b.中温微生物：其**适成长温度通常在20℃－45℃之间

　　c.嗜热微生物：成长温度在45℃以上。

３）水分

　　水分是微生物进行成长的必要条件。芽孢、孢子萌生，shou要需求水分。微生物是不能脱离水而生计的。可是微生物只能在水溶液中成长，而不能生活在纯水中。各种微生物在不能成长发育的水分活性范围内，均具有狭小的适当的水分活性区域。

４）氧气

　　依照微生物对氧气的需求状况，可将它们分为以下五个类型。

　　a.需氧微生物

　　这类微生物需求氧气供呼吸之用。没有氧气，便不能成长，可是高浓度的氧气对需氧微生物也是有毒的。许多需氧微生物不能在氧气浓度大于大气中氧气浓度的条件下成长。jue大多数微生物都属于这个类型。

　　b.兼性需氧微生物

　　这类微生物在有氧气存在或无氧气存在状况下，都能成长，只不过所进行的代谢路径不一样算了。在无氧气存在的条件下，它进行发酵效果，例如酵母菌的无氧乙醇发酵。

　　c.微量需氧微生物

　　这类菌是需求氧气的，但只在0.2大气压下成长**佳。这可能是由一它们富含在强氧化条件下失活的酶，因此只要在低压下效果。

　　d.耐氧微生物

　　这类微生物在成长进程中，不需求氧气，但也不怕氧气存在，不会被氧气所杀死。

　　c.厌氧微生物

　　这类微生物在成长进程中，不需求分子氧。分子氧存在对它们成长发生毒害，不是被抑制，即是被杀死。#p#分页标题#e#

２、培育办法

1）依据培育时是否需求氧气，可分为好氧培育和厌氧培育两大类。

　　好氧培育：也称“好气培育”。即是说这种微生物在培育时，需求有氧气参与，不然就不能成长良好。在试验室中，斜面培育是经过棉花塞从外界取得无菌的空气。三角烧瓶液体培育多数是经过摇床振动，使外界的空气源源不断地进入瓶中。

　　厌氧培育：也称“厌气培育”。这类微生物在培育时，不需求氧气参与。在厌氧微生物的培育进程中，**主要的一点即是要除掉培育基中的氧气。通常可选用下列几种办法：

　　a.下降培育基中的氧化复原电位：常将复原剂如谷胱甘肽、硫基醋酸盐等，参与到培育基中，便可到达意图。有的将一些动物的死的或活的安排如牛心、羊脑参与到培育基中，也可适宜厌氧菌的成长。

　　b.化合去氧：这也有许多办法，主要有：用焦性没食子酸吸收氧气；用磷吸收氧气；用好氧菌与厌氧混合培育吸收氧气；用植物安排如发芽的种子吸收氧气；用发生氢气与氧化合的办法除氧。

　　c.阻隔阻氧：深层液体培育；用白腊油封存；半固体穿刺培育。

　　d.代替驱氧 用二氧气碳驱代氧气；用氮气驱代氧气；用真空驱代氧气；用氢气驱代氧气；用混和气体驱代氧气。

２）依据培育基的物理状况，可分为固体培育和液体培育两大类。

　　固质培育：是将菌种接**疏松而赋有养分的固体培育基中，在适宜的条件下进行微生物培育的办法。

 

　　液体培育：在试验中，经过液体培育能够使微生物敏捷繁衍，取得许多的培育物，在必定条件下，仍是微生物挑选增菌的有效办法。