摘要：本文系统的介绍了运用立式高压灭菌锅对培养基灭菌的使用方法以及注意事项。高压灭菌锅作为实验室中必不可少的仪器之一，在培养基的灭菌方面具有不可代替的作用。此外，在废物处理方面，凡含有病原微生物的废物必须经过灭菌才能作为普通废物处理。特别是对操作中可能产生的迸溅或泄漏必须进行消毒,从而达到对病原微生物的杀灭,对操作人员、对环境进行保护的目的。
 
关键字：高压灭菌锅  灭菌 培养基  使用  注意事项
 
介绍
    高压蒸气灭菌锅是目前应用**广泛、灭菌效果**好的灭菌器具之一，其种类有手提式、直立式、横卧式等。它们的构造及灭菌原理基本相同。高压蒸汽灭菌锅属于高压蒸汽灭菌器之一，它具有耐高温、高压、不怕潮湿等优点。此外，由于高压灭菌锅具有造型新颖美观、结构合理、功能齐全、加热迅速、灭菌彻底等优点，因此它广泛适用于医疗、科研、食品、等单位对手术器械、敷料、玻璃器皿、橡胶制品、食品、药液、培养基等物品进行灭菌，成为灭菌的得力助手。
 
结构
   立式高压蒸汽灭菌锅是一个密闭的耐高温和耐高压的双层金属圆筒，两层之间盛有水。内外皆有金属制成。
   1.外锅：供装水产生蒸汽之用。坚厚，其上方或前方有金属厚盖，盖有螺栓，借以紧闭盖门，使蒸汽不能外溢。加热后，灭菌器内蒸汽压力升高，温度也随之升高，压力越大，温度越高。
外锅壁上还装有排气阀、温度计、压力表及安全阀。排气阀用于排出空气；压力表：以表示锅内压力及温度（公制压力单位为公斤/cm2、英制压力单位磅/英寸2、温度单位℃）；安全阀又称保险阀，利用可调弹簧控制活塞，超过定额压力即自行放汽减压，以保证在灭菌工作中的安全^[1]。
    2.内锅：为放置灭菌物的空间。空间大约为0.5平方米
3.管路系统：管路系统由安全阀,真空阀、气动阀等和锅体组成,整体耐压为6巴。（水压试验为8巴）。
4.自动控制系统：
本机装有英G公司制造的组合式温度压力自动控制记录仪实施灭菌过程的温度压力和时间的预先调节控制和有关参数的记录。
5.手动控制系统:                                                                 本机还有手动控制系统。手动控制是通过手动阀门来调节两锅的温度和压力的。同样有下水、升温、保温、上水、冷却五个阶段,其程序过程与自动控制相同。整个程序的温度、压力和时间参数仍可由组合式温度压力自动控制记录仪予以记录。
 
工作原理
高压蒸气灭菌方法的原理是水在大气中100℃左右沸腾，水蒸气压力增加，沸腾时温度将随之增加，因此，在密闭的高压蒸气灭菌器内，当压力表指示蒸气压力增加到15磅(1.05kg/cm)时，温度则相当于121.3，在这种温度下20min即可完全杀死细菌的繁殖体及芽胞。
热力灭菌是应用**早、效果**可靠、使用**广泛的一种物理灭菌方法,热力对细胞壁和细胞膜的损伤以及对核酸的作用,均可导致微生物的死亡,而湿热主要是使微生物蛋白质发生凝固而导致其死亡。压力蒸汽灭菌器就是利用湿热杀灭微生物的原理而设计的。采用湿热灭菌方法的优点在于蒸汽有较强的杀菌作用,它可以使菌体蛋白质含水量增加,使其容易因受热而凝固,加速微生物的死亡过程^[2]。
 
使用方法
 1工作环境
 环境要求通风、宽敞、地面平整、干净、整洁，不能与有腐蚀性物品摆放在同一空间。
  2.人员要求
操作人员应穿工作服，使用时不得擅离工作岗位。
  3.操作步骤
     ①开盖：向左转动手轮数圈，直**转动到顶，使锅盖充分提起，拉起左立柱上的保险销，向右推开横梁移开锅盖。
     ②通电：接通电源，此时欠压蜂鸣器响，显示本机锅内无压力（当锅内压力升**约0.03Mpa时蜂鸣器自动关闭），控制面板上的低水位灯亮，锅内属断水状态。
     ③加水：将纯水或生活用水直接注入蒸发锅内约8升，同时观察控制面板上的水位灯，当加水**低水位灯灭，高水位灯亮时停止加水。当加水过多发现内胆有存水，开启下排汽阀放去内胆中的多余水量。
     ④放样：将培养基堆放在灭菌筐内，各包之间留有间隙，有利于蒸气的穿透，提高灭菌效果。密封：把横梁推向左立柱内，横梁必须全部推入立柱槽内，手动保险销自动下落锁住横梁，旋紧锅盖。
     ⑤设定温度和时间：按一下确认键，进入温度设定状态，按上下键可以调节温度值，再次按下确认键，进入时间设定状态，按左键或上下键设置需要的时间，再次按动确认键，设定完成，仪器进入工作状态，开始加热升温。
     ⑥灭菌结束后，关闭电源，待压力表指针回落零位后，开启安全阀或排汽排水总阀，放净灭菌室内余气。若灭菌后需迅速干燥，须打开安全阀或排汽排水总阀，让灭菌器内的蒸汽迅速排出，使物品上残留水蒸气快速挥发。灭菌液体时严禁使用干燥方法。#p#分页标题#e#
⑦启盖：同**步。向左转动手轮数圈，直**转动到顶，使锅盖充分提起，拉起左立柱上的保险销，向右推开横梁移开锅盖^[3]。
**后，取出培养基，则取出的培养基达到了灭菌的标准。
 
注意事项
①堆放培养基时应注意安全阀放汽孔位置必须留出空气，保障其畅通，否则易造成锅体爆裂事故。
②灭菌液体时，应将液体灌装在耐热玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，瓶口选用棉花纱塞。
③本器尽量使用纯水，以防产生水垢^[4]。
对于许多运用高压蒸汽灭菌锅消毒的物体，不仅仅是玻璃器皿，还有无菌包及布类等等物体，因此，需要特别注意。
    **，无菌包不宜过大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态。
　　第二，布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果^[5]。
第三，定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以1周为宜。
 
高压蒸汽灭菌效果的监测：
   对灭菌效果的检测有以下三种方法：
   一种是工艺监测，又称程序监测。根据安装在灭菌器上的量器（压力表、温度表、计时表)、图表、指示针、报警器等，指示灭菌设备工作正常与否。此法能迅速指出灭菌器的故障，但不能确定待灭菌物品是否达到灭菌要求。此法作为常规监测方法，每次灭菌均应进行检测。
另一种是化学指示监测。利用化学指示剂在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点，以判断是否达到灭菌所需参数^[6]。
还有一种是生物指示剂监测。利用耐热的非致病性细菌芽胞作指示菌，以测定热力灭菌的效果。菌种用嗜热脂肪杆菌，生物指示剂有芽胞悬液、芽胞菌片以及菌片与培养基混装的指示管。检测时应使用标准试验包，每个包中心部位置生物指示剂2个，放在灭菌柜室的上、中层的中央各一个点，下层的前、中、后各一个点。灭菌后，取出生物指示剂，接种于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，置55-60℃温箱中培养48小时**7天，观察**终结果。若培养后颜色未变，澄清透明，说明芽胞已被杀灭。达到了灭菌要求。若变为黄色混浊，说芽胞未被杀灭，灭菌失败^[7]。
 
结论：
通过使用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌，并且可以检测灭菌效果是否达到要求。因此，我们可以得到经过灭菌了的符合要求的培养基。